一、如何选择合适的二抗宿主
二抗应直接针对一抗种属，而不是来自于与一抗相同的种属。建议考虑以下因素：
1、种属来源和种属反应性
2、特异性反应
3、纯化方法
4、交叉吸附
5、多重检测能力
6、抗体类型和亚型
7、完整抗体还是抗体片段
8、标记物
9、生物素结合蛋白
二、选择哪种形式的二抗
1、Whole(整个)IgG分子：此种抗体适用于多数情况。
2、Fab片段：它们只有一个结合位点，一般用来封闭内源性免疫球蛋白。
3、F(ab')2片段：该种抗体是由两个靠二硫键连接的用于结合抗原的Fab片段组成，这些抗体用在特定的情况中，如需要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况。
三、选择正确的种属来源和反应物种
二抗的选择首要基于一抗，应与一抗的种属来源相对应，且需要来自于不同的物种
四、抗体特异性的选择
要注意区分二抗的特异性和形式的不同，特异性指的是二抗识别的不同一抗亚型或某特殊区域。抗体的特异性主要基于以下三种形式：轻链特异性、Fc端特异性、亚型特异性
五、二抗的类别亚型
1、IgM是体液免疫应答首先产生的Ig；
2、IgA是机体黏膜防御感染的重要因素；
3、IgG是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体，它仅以单体形式存在。大多抗菌性、抗毒性和抗病毒抗体属于IgG；
4、IgE是同速发型过敏反应发生有关的Ig；
5、IgD以膜结合形式存在于B细胞，在B细胞分化发育中起重要调节作用。