免封闭PAGE凝胶超快速制备试剂盒15%

aOne Step PAGE Gel Fast Preparation Kit

免封闭PAGE凝胶超快速制备试剂盒

产品内容

产品简介

本试剂盒适用于Tris-甘氨酸电泳体系，其中包括PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需制胶器具，不需要纯水封闭分离胶，不需要额外加入TEMED，即可制备PAGE凝胶。所配置的浓缩胶带有颜色，便于上样。本试剂盒中过硫酸铵以溶液形式提供，可保证过硫酸铵溶液在4℃稳定保存三个月。

保存方法

1. 本试剂盒保存于4℃，其中改良型过硫酸铵溶液长期储存置于-20℃，1年有效。

操作步骤

以一块0.75/1.00/1.50mm厚的mini胶为例。

1. 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

2. 取等体积的分离胶溶液（2×）和分离胶缓冲液（2×），各2 / 2.7 / 4mL，混匀。

3. 取等体积的浓缩胶溶液（2×）和浓缩胶缓冲液（2×），各0.5 / 0.75 / 1mL，混匀。

4. 向步骤2已混合溶液中加入40 / 54 / 80ul的改良型过硫酸铵溶液，轻轻搅拌混匀，避免产生气泡。将混匀后的溶液注入凝胶模具中，使液面距离短玻璃板上沿约1.5cm即可。

5. 向步骤3已混合溶液中加入10/ 15 / 20ul的改良型过硫酸铵溶液，轻轻搅拌使其混匀，不需要等待下层胶凝固，可直接将混匀后的溶液缓慢注入分离胶溶液上面，插入梳子。注意加入分离胶后要在2分钟内将浓缩胶注入凝胶模具内，且在灌注浓缩胶时要缓慢，防止浓缩胶与分离胶混合在一起。

6. 静置约15分钟，等待浓缩胶凝固，小心地拔出梳子，用注射器或枪头，吸取电泳缓冲液将加样孔冲洗干净，即可进行常规电泳操作。

注意事项

1. 蛋白条带的清晰和平直与电泳条件相关，如果需要蛋白条带更加清晰、平直，建议电泳时电压在100-120V之间，如需要加快电泳速度，可增加至150V。

2. PAGE凝胶的凝聚速度与温度和过硫酸铵的用量密切相关，可通过改变过硫酸铵的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作，应根据实际操作情况做适当的调整。

3. 本产品已加入TEMED替代品，如需进一步加速凝胶，可在配置时加入TEMED。

4. 本产品凝胶速度较快，不需将凝胶模具放置在37℃温箱或者空调口下，正常室温条件下配置即可。

5. 浓缩胶缓冲液（2×）内含有染料，因染料本身性质，长期静置后会产生沉淀，使用前请轻柔混匀。

                      附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围